Chromatografia / CHROMSERVIS.EU

Kolumny ChromShell i rozpuszczalniki

Stosując kolumny HPLC ChromShell^®, należy wziąć pod uwagę kilka ważnych cech rozpuszczalników organicznych stosowanych w fazie ruchomej. Lepkość jest najważniejszym parametrem, ponieważ rozpuszczalniki o wysokiej lepkości są przyczyną wzrostu przeciwciśnienia w układzie HPLC. Inne ważne parametry to " Odcięcie UV ", wskaźnik polarności i cena. Rozpuszczalniki o wysokiej wartości granicznej parametru „UV” pogorszyć czułość w detektor UV / VIS i niskiej polarności rozpuszczalnika spowodowania szybkiego wydzielania związków organicznych, i są powszechnie stosowane do czyszczenia lub regeneracji kolumny.

Acetonitryl

jest prawdopodobnie najlepszym rozpuszczalnikiem organicznym stosowanym w mieszaninie z wodą, ponieważ zapewnia najniższe ciśnienie wsteczne w systemach HPLC. Jednocześnie ma bardzo niskie " odcięcie UV ", a tym samym doskonałą czułość w detektorach UV / Vis. Największym minusem jest jego cena, która ostatnio znacznie wzrosła.

Metanol

jest innym bardzo popularnym rozpuszczalnikiem mającym podobną siłę wymywania jak acetonitryl, ma stosunkowo niską absorbancję UV i jest znacznie tańszy niż acetonitryl. Główną wadą metanolu, gdy jest stosowany z kolumnami HPLC o niskim rozmiarze cząstek jest tworzenie się wyższego ciśnienia wstecznego, które może przekraczać granicę HPLC przyrządu.

Aceton

to mniej zużyty rozpuszczalnik ze względu na wysoką absorpcję promieniowania UV. Czasami stosuje się go w analizach związków absorbujących przy wyższych długościach fal lub w połączeniu z innymi typami detektorów, np. MS.

Etanol

zwykle nie jest zalecany do stosowania z HPLC. Mieszanie z wodą powoduje wysokie ciśnienie wsteczne.

Iso-, n-propanol

mają stosunkowo silną siłę wymywania i są używane głównie do czyszczenia kolumn przy niskich przepływach, ponieważ generują one również wysokie przeciwciśnienie.

Tetrahydrofuran

ma podobną moc wymywania, jak n-propanol, ale ze względu na wyższą cenę jest stosowany rzadziej.

Dezaktywacja szkła

Dezaktywuj szkło za pomocą DMDCS

Dimetylodichlorosilan (DMDCS) reaguje z aktywnymi grupami hydroksylowymi obecnymi na powierzchni szkła, tworząc dezaktywowaną powierzchnię. Proces ten jest wykonywany przez obojętne szklane naczynia przeznaczone przede wszystkim dla wrażliwych związków.

Procedura

Podczas dezaktywacji powstaje chlorowodór (HCl). Dlatego konieczne jest wyłączenie maski.

Użyj 5% DMDCS w toluenie, aby dezaktywować. Roztwór można wytworzyć przez rozpuszczenie 20 ml DMDCS w 400 ml toluenu. Przechowywać roztwór w ciemnym szklanym pojemniku w temperaturze pokojowej.
Zanurzyć szklane pojemniki do dezaktywacji w 5% DMDCS przez 15 do 30 minut.
Opłucz szkło dwukrotnie toluenem.
Zanurz szkło w metanolu na 15 minut.
opłucz szklankę metanolem.
Wysuszyć szkło czystym azotem (bez wilgoci i węglowodorów).

Ustawienie prędkości liniowej

Prędkość liniowa jest ważnym parametrem w chromatografii, co ma wielki wpływ na skuteczność oddzielania. Dlatego ważne jest opracowanie metod deadweight i określenia czasu.

Liniowy pomiar prędkości w GC

Czas martwy określa się przez natryskiwanie 2 μl związku, który nie ma retencji w kolumnie chromatograficznej i jest wykrywalny przez zastosowany detektor. Używając strzykawki gazoszczelnej, weź fazę gazową lub gazową związku i dozuj na chromatograf. Dokładnie zmierzyć czas wtrysku i czas wymywania, z którego określa się czas martwy.

Zalecane związki do pomiaru objętości martwej w GC
Detektor	Związek
FID	metan, propan, butan
ECD	chlor, powietrze (przy niskiej temperaturze termostatu)
TCD	metan, butan, powietrze (przy niskiej temperaturze termostatu)
NPD	acetonitryl, powietrze (przy niskiej temperaturze termostatu)
MS	propan, butan, argon, powietrze (przy niskiej temperaturze termostatu)
PID	acetylen, etylen

Uwaga: Niektóre związki mogą mieć niewielką retencję na kolumnach grubowarstwowych, ale mogą być odtwarzalne dla podobnych typów kolumn.

Zastosowanie chiralnych kolumn

Czy wiesz, jak poprawnie używać chiralnych kolumn celulozowych/amylozowych?

Kolumny chiralne są transportowane w n-heksanie/2-propanolu (9: 1, v/v). Każda kolumna jest indywidualnie testowana i zawsze zaopatrzona w certyfikat jakości i parametry separacji do oznaczania tlenku trans-stylibenu .

Korzystanie z faz mobilnych

Kolumny Lux można stosować zarówno w fazie normalnej (mieszaniny n-alkanów / alkoholi) w fazie odwróconej (woda / MeOH, woda / ACN i bufor / MeOH i bufor/ACN) lub polarne rozpuszczalniki organiczne (100% ACN, niższe alkohole i ich mieszaniny).

Zgodność faz mobilnych

Zmieniając fazę ruchomą, zawsze należy postępować zgodnie z zalecaną procedurą mycia kolumn. Konieczna jest ocena mieszalności rozpuszczalników stosowanych każdorazowo. W celu bezpiecznego przekształcenia kolumny z heksanu w metanol (ACN) i odwrotnie, zawsze stosować jako rozpuszczalnik transportowy 100% 2-propanol przy przepływie 0,2 - 0,5 ml/min. Aby niezawodnie usunąć oryginalną fazę ruchomą, przepłukać kolumnę około 10 razy większą niż objętość kolumny (tj. 25 ml 100% 2-propanolu dla kolumny 250 x 4,6 mm, 15 ml dla 150 x 4,6 mm). Dodatkowo, jeśli bufor nie miesza się z 2-propanolem, przepłukać kolumnę przed i po użyciu tego buforu z 100% wody.

Używanie modyfikatorów fazy ruchomej

W przypadku niektórych kwaśnych lub zasadowych środków chiralnych, do uzyskania odpowiedniej separacji chiralnej lub pożądanego kształtu piku, należy zastosować specyficzne modyfikatory MF. W próbkach zasadowych można stosować dietyloaminę, etanoloaminę lub butyloaminę w stężeniach 0,1 - 0,5 %, natomiast kwas octowy lub kwas trifluorooctowy zazwyczaj w stężeniu 0,1 - 0,2 % w przypadku próbek kwaśnych. Możliwe są również mieszaniny dodatków zasadowych i kwasowych, np. Octan dietyloaminy lub trifluorooctan. Kolumny Lux dają te same wyniki, stosując wszystkie wyżej wymienione rozpuszczalniki i modyfikatory MF we wskazanych stężeniach.

Niezgodne rozpuszczalniki

Kolumny chiralne są wytwarzane przez wiązanie różnych pochodnych polisacharydów z powierzchnią żelu krzemionkowego. Dlatego wszystkie rozpuszczalne w rozpuszczalnikach pochodne polisacharydów nie mogą stykać się z fazą stacjonarną, nawet przy dowolnym stężeniu, np. THF, aceton, chlorowane węglowodory, octan etylu, dimetylosulfotlenek, DMF, N-metyloformamid i tym podobne.

Limit ciśnienia

Przepływ fazy ruchomej należy tak ustawić, aby ciśnienie wsteczne nie przekraczało 300 barów (4300 psi).

Temperatura pracy

Stosując standardowe fazy ruchome (takie jak n-alkan / alkohole), zakres temperatur kolumn Lux wynosi 0-50 ° C.

Przechowywanie kolumn

Przy dłuższym przechowywaniu zaleca się przechowywanie kolumn w n-heksanie/2-propanolu (9: 1, v/v). Kolumny użyte w odwróconym MF należy najpierw przemyć wodą (gdy bufor był stosowany jako modyfikator MF), a następnie samym metanolem i / lub metanolem, jeśli bufor nie był używany. Kolumnę można również przechowywać w metanolu.

Przedłużyć żywotność kolumn

Chromservis zaleca stosowanie systemu kolumn zabezpieczających uchwyt kolumny przedniej i odpowiednich kolumn wstępnych, aby zapewnić długotrwałą i bezproblemową separację kolumn, szczególnie w przypadku rozdzielania próbek uzyskanych ze złożonych i złożonych macierzy. Optymalnie, próbka powinna zostać całkowicie rozpuszczona w odpowiednim MF, a następnie przefiltrowana przez filtr strzykawkowy o porowatości 0,45 μm.

Wskazówki i porady

Laboratorium Ta strona zawiera informacje techniczne, wskazówki i porady dotyczące podejmowania decyzji i zaleceń dotyczących wyboru akcesoriów chromatograficznych.

Dynamiczna przestrzeń headspace

Metoda Dynamic Headspace (DHS) jest stosowana w szerokim zakresie aplikacji środowiskowych. Największe zastosowanie ma w analizie lotnych związków organicznych (LZO) w piciu, metodzie, powierzchni i ściekach. Te matryce zawierają mieszaninę związków o różnej polarności i lotności (chlorowane węglowodory, aromatyczne węglowodory, związki tlenu i podobne). Dynamiczna przestrzeń nad powierzchnią jest również używana dla tych aplikacji:

charakterystyka przypraw, ziół, żywności, mydeł i substancji zapachowych
oznaczanie resztkowych monomerów i LZO w polimerach
analiza pozostałości rozpuszczalników w opakowaniach żywności i produktach farmaceutycznych
weryfikacja "żywności ekologicznej"
analiza śladowa aktywnych składników farmaceutycznych
analiza metabolitów w płynach biologicznych (węglowodory aromatyczne w moczu, benzen we krwi)

Zasada dynamicznej przestrzeni nad powierzchnią

Instalacja kapilarnych kolumn GC

Krótka procedura instalowania kapilarnych kolumn GC

Uwaga: Jeśli nowa kolumna, należy wykonać klimatyzację przed ustawieniem optymalnego czasu martwego.

Konwersje jednostek

Kapilarna objętość HPLC

ID (mm)	ID (cal)	μl / cm	μl / cal	ID (mm)	ID (cal)	μl / cm	μl / cal
0,050	0,002 "	0,02	0,05	1,00	0,040 "	7,85	20,59
0,064	0,0025 "	0,03	0,08	1,40	0,055 "	15.39	38,93
0,075	0,003 "	0,04	0.12	1.52	0,060 "	18.15	46,33
0.10	0,004 "	0,08	0,21	1.59	0,062 "	19,86	49,47
0.13	0,005 "	0.13	0,32	1,65	0,065 "	21,38	54,38
0.17	0,0067 "	0,23	0,58	1.70	0,067 "	22,70	57,78
0,18	0,007 "	0,25	0,63	1,78	0,070 "	24,88	63.06
0,25	0,010 "	0,49	1.29	2,00	0,079 "	31,42	80,32
0,38	0,015 "	1.13	2,90	2.10	0,083 "	34,64	88,66
0,50	0,020 "	1,96	5.15	2.16	0,085 "	36,64	92,99
0,75	0,030 "	4,42	11,58	2,40	0,094 "	45,24	113,72

Dodatek UV odcinający fazę ruchomą

Przyłączeniowy	Odcięcie UV (nm)
Kwas octowy, 1%	230
Octan amonu, 10 mM	205
Węglan amonu, 10 mM	190
Wodorofosforan amonu, 50 mM	205
CAPS kwas 3-(cykloheksyloamino)etanosulfonowy, 0,1%	215
EDTA, 1 mM	190
Kwas solny, 0,1%	190
Wodorofosforan wapnia, 10 mM	190
Wodorofosforan wapnia, 10 mM	190
MES Kwas 2-(N-morfolino)etanosulfonowy, pH 6,0, 10 mM	215
Octan sodu, 10 mM	205
cytrynian sodu, 10 mM	225
Dodecylosiarczan sodu, 10 mM	190
Mrówczan sodu, 10 mM	200
Kwas heksanosulfonowy sodu, 5 mM	225
TEA, (trietyloamina), 1%	235
TFA (kwas trifluorooctowy), 0,1%	190
Diwodorofosforan tetrabutyloamoniowy, 5 mM	200
TRIS HCl (Tris(hydroksymetylo)aminometan), pH 7,0, 20 mM	202
TRIS HCl (Tris(hydroksymetylo)aminometan), pH 8,0, 20 mM	212

Konwersja jednostek i tabel

Konwersje jednostek on-line:

Chromatografia